Серологическая диагностика туберкулеза

Серологическая диагностика туберкулеза

У зараженных туберкулезом и вакцинированных БЦЖ людей и животных в сыворотке крови содержатся специфические антитела — агглютинины, преципитины, бактериолизины, комплементсвязывающие вещества и др.

Для их выявления Middlebrook и Dubos (1948) предложили определять реакцию непрямой, или пассивной, гемагглютинации. Диагностическое значение этой реакции различно оценивается отдельными авторами. По сводным литературным данным, она оказывается положительной почти у 70% больных активным туберкулезом и у 25% здоровых людей с отрицательной пробой Манту.

При этом нет закономерной связи между реакцией гемагглютинации и формой туберкулеза легких или других органов, хотя при затихании, а тем более при потере активности процесса она бывает положительной не более чем в 20 % случаев. В дальнейшем Boyden (1951) предложил другой вариант этой реакции, позволяющий чаще обнаруживать в сыворотке крови антитела к различным белковым антигенам. Разработаны, кроме того, гемолизиновый метод реакции непрямой агглютинации и люминесцентно-серологический способ определения антител.

Испытаны при туберкулезе и различные модификации реакции связывания комплемента. Используя в качестве специфического антигена сухой очищенный туберкулин, или так называемый сложно-смешанный антиген, содержащий белковые фракции, липиды и полисахариды микобактерий туберкулеза, а также экстракт творожистых масс легкого, получают в 70—90% положительные результаты у больных туберкулезом.

Между тем при других заболеваниях и у здоровых реакция связывания комплемента дает ложноположительную реакцию в 10—15%.

Примепяя тот же антиген в нашей клинике, мы могли отметить положительную реакцию связывания комплемента у 74,5% больных активным туберкулезом, у 16,3% лиц, страдавших неспецифическими заболеваниями легких, и у 11% здоровых (доноров). Приблизительно такие же данные приводят И. В. Походзей и соавт. (1971), А. Я. Цигельник и соавт. (1969). Таким образом, несмотря на сравнительно высокую чувствительность этой реакции, она все же оказывается отрицательной у части больных активным туберкулезом легких и ложноположительной при неактивных его формах, а также у больных бронхиальной астмой, хронической пневмонией, раком и даже у здоровых.

Это обстоятельство побуждает с известной осторожностью оценивать значение реакции связывания комплемента в определении иммунологического состояния организма больных туберкулезом, причем лишь в сочетании с другими клинико-лабораторными способами исследования.

Универсальный альтернативный вариант иммунологического исследования in vitro диагностики туберкулезного процесса путем количественного определения мононуклеарных клеток периферической крови, продуцирующих ИФН-γ в ответ на присутствие белков CFP-10 и ESAT-6 M. tuberculosis.

Иммунологический тест на туберкулез

Синонимы английские

Testing for tuberculosis infection

Прямая оценка функции T-клеток энзим-связывающий иммуноспотингом (ELISPOT).

Зарегистрирован в РФ в 2012 г. (рег. УД. № ФСЗ 2012/648).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.

Общая информация об исследовании

Возбудителем туберкулёза является микобактерия туберкулеза (МБТ, палочка Коха, Mycobacterium tuberculosis) – высокоустойчивый микроорганизм. В настоящее время описано около 150 видов микобактерий, но клинически значимыми признаны М. tuberculosis (более 90 % всех случаев туберкулезной инфекции), М. bovis (5 %) и М. africanum (около 3 % – главным образом среди населения стран тропической Африки).

Читайте также:  Закись азота воздействие на организм человека

Источником инфекции являются больные люди и животные. Наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или через поврежденную кожу.

Попадая в окружающую среду, возбудитель способен длительно сохраняться: в высохшей мокроте он выживают до 10 месяцев, на предметах, окружающих больного (белье, книги), – более 3 месяцев, в воде – более года, в почве – до 6 месяцев.

В настоящее время описаны следующие варианты развития ситуации после проникновения МБТ в организм человека: [1]

  • полная элиминация (удаление) возбудителя из организма;
  • развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении МБТ);
  • инфицирование, или "латентная туберкулезная инфекция" (ЛТИ), [2] – состояние стойкого иммунного ответа на антигены МБТ при отсутствии клинических проявлений активной формы туберкулеза.

Присутствующий в организме возбудитель способен не только длительно бессимптомно персистировать в организме, но при определенных обстоятельствах (интенсивное размножение МБТ на фоне малоэффективного иммунитета и т.д.) реактивироваться и вызвать развитие заболевания. В настоящее время установлено, что с момента инфицирования МБТ в течение первого года заболевание развивается у 5 % инфицированных людей, в течение всей оставшейся жизни туберкулез развивается еще у 5 %, то есть пожизненный риск заболевания туберкулезом среди инфицированных составляет 10 %.

Вместе с тем наличие различных факторов может способствовать повышению риска развития локального туберкулеза: так, при ВИЧ-инфицировании ежегодный риск заболевания туберкулезом на фоне ЛТИ составляет 10 %, а пожизненный риск – 50 %.

Диагностика туберкулеза является комплексной и включает, согласно регламентирующим документам, [3] аллергические внутрикожные пробы (реакция Манту и "Диаскинтест"), инструментальное обследование (ФЛГ, рентген) и лабораторные – направленные как на выявление и идентификацию возбудителя с определением спектра его чувствительности к препаратам этиотропной терапии, так и на изучение выраженности иммунологической реакции на патоген.

Одним из современных и высокоинформативных методов определения специфической иммунной реакции на МБТ, особенно при отсутствии или минимальных клинико-инструментальных признаках инфекции и сомнительных результатах общепринятых методов лабораторной диагностики туберкулеза, является тест T-SPOT.

Исследование иммунного Т-клеточно-опосредованного ответа: количественное определение в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Эти белки входят в состав клинически значимых МБТ (М. tuberculosis, М. bovis, М. africanum) и отсутствуют у бактерий, используемых при производстве вакцины БЦЖ и у непатогенных для человека микобактерий.

Преимущества теста Т- SPOT:

  • высокая специфичность и чувствительность метода (87-97 %);
  • безопасность, отсутствие побочных реакций;
  • отсутствие ложноположительных результатов;
  • результат исследования не зависит от наличия вакцинации БЦЖ;
  • не имеет противопоказаний и ограничений по времени проведения;
  • позволяет диагностировать внелегочные формы туберкулеза;
  • позволяет диагностировать инфекцию у пациентов с ВИЧ и низкими показателями уровня CD4. [4]

Для чего используется исследование?

  • Диагностика туберкулезной инфекции.

Когда назначается исследование?

  • Пациентам, у которых в связи с основным заболеванием (эпилепсия, хронические заболевания в стадии обострения и др.) затруднено проведение внутрикожных тестов.
  • При наличии в анамнезе пациента токсико-аллергических реакций на туберкулин.
  • Детям, привитым БЦЖ, у которых выявлена ложноположительная реакция Манту, – до проведения инструментального обследования легких. [5]
  • По эпидемиологическим показаниям – пациентам, прибывшим из стран с высоким уровнем заболеваемости туберкулезом (Африка, Азия) и/или находившимся в контакте с лицами с диагностированным заболеванием.
  • Пациентам с аутоиммунными и др. заболеваниями (силикоз), ведущими к снижению системного иммунитета.
  • Пациентам, получающим системное лечение глюкокортикоидами или иммуносупрессивную терапию.
  • Онкологическим пациентам, получающим лучевую и химиотерапию.
  • Пациентам на диализе или готовящимся к трансплантации органов или переливанию крови.
  • ВИЧ-инфицированным, особенно со снижением количества СD4-клеток.
  • При подозрении на внелегочные формы туберкулеза.
Читайте также:  Вобэнзим для глаз

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА.

Неоспоримое преимущество использования бактериологических методов в диагностике туберкулеза состоит, прежде всего, в 100% специфичности, при этом возможные ошибки можно отнести только лишь на счет «человеческого фактора». Однако микробиологические анализы имеют достаточно низкую чувствительность (так, выявление положительных проб при диагностике туберкулеза внелегочной локализации, а также в случаях легочного туберкулеза у детей и престарелых, не превышает 50%). Тем не менее, культуральные методы считаются сегодня «золотым стандартом» в диагностике туберкулеза, так как ни один другой подход не позволяет достичь лучших результатов. Существенным недостатком бактериологического исследования являются сроки анализа (6-12 недель с использованием традиционных методов или 9-14 дней при помощи автоматических анализаторов). Первичная микроскопия окрашенного мазка мокроты также относится к весьма специфичным методам (75-98%). К сожалению, чувствительность в данном случае весьма ограничена (требуется не менее 104 бактерий/мл, тогда как для культурального метода необходимо 10-100 клеток/мл).

Определение антител к возбудителю туберкулеза в сыворотке крови – новый и очень перспективный серологический метод диагностики туберкулеза. Этот подход может быть очень полезен для выявления пульмонарного туберкулеза у детей и престарелых (метод не требует сбора мокроты и множественных рентгенологических исследований), а также при диагностике внелегочных форм туберкулеза. Преимущества метода:

· Для проведения анализа необходимо 1,5-2 часа.

· Анализ прост в исполнении и легко воспроизводим. Для его постановки необходимо стандартное ИФА оборудование. Возможна автоматизация.

· Не требуется работы с пробами, содержащими патоген.

· Не требуется проведения тяжелых инвазивных процедур (биопсии) в случаях внелегочного туберкулеза.

· Метод позволяет выявить инфекцию даже тогда, когда количества бактерий еще не достаточно для проведения микроскопического анализа.

· Исключена субъективная интерпретация результатов.

· Метод основан на выявлении антител к возбудителю, а не его антигенов, следовательно, может с успехом использоваться в тех случаях, когда прямое выявление патогена затруднено.

предлагает иммуноферментные тест-системы фирмы ANDA biological (Франция), которая в последние два десятилетия специализируется исключительно на серологической диагностике туберкулеза. С помощью этих наборов возможно проводить полуколичественное определение IgG-, IgA-антител и качественное определения IgM-антител в сыворотке, мокроте, слюне, плевральном экссудате, спинно-мозговой жидкости, моче. В представляемых системах в качестве антигена используется комплекс А60.

Антигенный комплекс А60 является специфичным антигеном, обнаруженным в цитозоле типичных и атипичных микобактерий (Mycobacterium, Corynebacterium, Nocardia). В 85% случаев инфицирования Mycobacterium tuberculosis появляются антитела к А60. Специфичность anda-tb тестов — 71-100% при внелегочном туберкулезе и 85-100% при легочном туберкулезе. Показано, что ИФА тест-системы с использованием А60 всегда более чувствительны, чем микроскопия, и имеют такую же чувствительность, что и бактериологические методы. Подобные системы позволяют быстро обнаружить источник инфекции, диагностировать туберкулез как легочной, так и внелегочной локализации, осуществлять контроль за эффективностью лечения и раннее выявление случаев рецидивов, оценить напряженность поствакцинального иммунитета. Кроме того, эти системы с успехом используются для мониторинга за пациентами с муковисцидозом (раннее выявление микобактериальных инфекций) и ВИЧ (прогнозирование риска поражения M. avium).

Читайте также:  Что такое анализ на

Антитела к микобактериям отсутствуют у здоровых лиц. Однако, бессимптомные или абортивные инфекции, обусловленные микобактериями, сегодня встречаются гораздо чаще, чем раньше. Так IgM-антитела часто выявляются после контактов, обусловленных профессиональной деятельностью (персонал больниц, социальные работники и др.) или в неблагоприятных социальных условиях (особенно у детей). Позитивный IgM-тест, полученный с использованием сыворотки или спинномозговой жидкости, особенно полезен при установлении диагноза туберкулезного менингита, для серодиагностики латентного легочного туберкулеза или первичной внелегочной инфекции, а также для прогноза в отношении рецидивов.

Здоровые неинфицированные люди негативны в отношении IgG-антител к микобактериям, даже в случае позитивной внутрикожной реакции или проживания в местности, эндемичной по туберкулезу. Преобладание бессимптомных субклинических инфекций в основном характерно для развивающихся стран, но они также встречаются и в развитых странах среди лиц, принадлежащих к определенным социальным и профессиональным группам (в целом в популяции серопозитивны 1,5-3%). У пациентов, страдающих туберкулезом, показано присутствие IgG-антител. Тест положителен в основном в случаях очевидной активной инфекции, а также после активной вакцинации здоровых людей. Присутствие IgG-антител свидетельствует о хорошем иммунологическом отклике пациента на инфекцию. Тест на IgG-антитела может быть эффективен в соответствии с локализацией пораженного органа при экстрапульмонарном туберкулезе. Так, например, туберкулезный менингит провоцирует образование антител в спинно-мозговой жидкости, достаточно легко выявляемое при разведении 1:10. У 10-20% пациентов наблюдается достаточно слабый гуморальный иммунологический отклик. У индивидуумов с подобной анергией может наблюдаться отсутствие IgG-антител (особенно до или в начале лечения), что можно отнести на счет превалирования реакций клеточного иммунитета.

Образование IgA-антител не зависит от синтеза IgG-антител и может наблюдаться даже у пациентов с IgG-анергическим статусом. IgA-антитела легко образуют комплексы с антигенами и играют роль в развитии воспалительных процессов в различных органах. Этот класс антител без труда можно выявить в сыворотке возможно здоровых индивидуумов из группы риска, в мокроте пациентов, страдающих пульмонарным туберкулезом и в биологических жидкостях пациентов с внелегочной локализацией туберкулеза. Специфические IgA-антитела обнаруживаются у 30% пациентов с гранулематозной болезнью Крона.

Нельзя не отметить, что серологическая диагностика туберкулеза ни в коей мере не может заменить классические микробиологические методы, которые и по сей день остаются золотым правилом в диагностике этого заболевания. Данные серологических исследований всегда необходимо рассматривать только в комплексе с результатами, полученными с помощью других диагностических методов (клинические признаки, бактериологические методы и пр.).

Ссылка на основную публикацию
Родинка отсохла и отвалилась
Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам. У нас есть строгие правила по...
Пятая диета меню
В начале 20 века впервые влияние питания на здоровье человека тщательно изучил российский гастроэнтеролог Мануил Певзнер. В результате своих многолетних...
Пятна в области паха у мужчин фото
Покраснения в паху у мужчин сигнализируют о том, что в организме протекает воспалительный процесс. При раздражении в области промежности появляется...
Родинка под подмышкой значение
В народе считается, что любая отметина на теле человека возникает не просто так. Каждая из них может рассказать знатоку примет...
Adblock detector